jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑 說明書要點(diǎn)

一、用途
用于將DNA（質(zhì)粒、siRNA、miRNA等）高效轉(zhuǎn)染至貼壁或懸浮培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。

二、操作流程（簡化版）

詳細(xì)版見《polyplus轉(zhuǎn)染試劑jetOPTIMUS®產(chǎn)品說明書》
A. 試劑準(zhǔn)備

使用前將jetPRIME® 室溫平衡15分鐘，輕柔混勻。

用無菌緩沖液（如150mM NaCl）稀釋DNA。

B. 混合

按比例混合稀釋的DNA與jetPRIME®（例如：1µg DNA : 2µL 試劑）。

渦旋振蕩10秒，室溫靜置10分鐘形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物。

C. 轉(zhuǎn)染

將復(fù)合物逐滴加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕柔搖晃培養(yǎng)皿混勻。

37°C孵育4-24小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基（視細(xì)胞類型而定）。

三、推薦比例（參考）

四、注意事項(xiàng)

細(xì)胞密度：轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞應(yīng)達(dá)60-80%匯合度。

血清兼容性：可直接加入含血清的培養(yǎng)基中。

保存條件：4°C儲(chǔ)存（勿冷凍），避免光照。

安全性：操作時(shí)戴手套，在生物安全柜中進(jìn)行。

五、提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的提示

（1）轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基。

（2）將DNA量減少到0.5倍，同時(shí)保持之前使用的DNA/jetOPTIMUS®比例。

（3）在較早的時(shí)間點(diǎn)（例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí)）分析轉(zhuǎn)染。

（4）在敏感細(xì)胞的還原血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

（5）檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。

（6）確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前已傳代兩次以上且少于20次。

（7）丟棄過度培養(yǎng)的細(xì)胞。

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